河蟹颤抖病病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：河蟹颤抖病病毒PCR检测试剂盒

英文【wén】名称【chēng】：Chinese Mitten Crabs Trembling Disease VirusRTPCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液（C）                                   毫【háo】升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物质主要【yào】有五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，河蟹颤抖病病毒PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的【de】特【tè】异性取决于【yú】引物与模【mó】板DNA互补的程度【dù】。理【lǐ】论上，只要知道任【rèn】何一段模板DNA序列， 就能【néng】按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用【yòng】PCR就【jiù】可将模板DNA在【zài】体【tǐ】外大量扩增。设【shè】计【jì】引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长【zhǎng】至10kb的【de】片段【duàn】。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以【yǐ】9-19%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果不【bú】佳，G+C过多易出现【xiàn】非特【tè】异条【tiáo】带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的成串排列。

④避免引【yǐn】物【wù】内部【bù】出现二级结构，避免【miǎn】两条引物间【jiān】互补，特别是【shì】3'端的互补，否则会形成引物二【èr】聚体，产生【shēng】非特异【yì】的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特【tè】别是末及倒数第【dì】二【èr】个【gè】碱基【jī】，应严格要求配【pèi】对，以避免因末【mò】端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能【néng】加上合适的酶切位点， 被【bèi】扩【kuò】增的靶序列*有适宜的【de】酶【méi】切位点， 这对【duì】酶【méi】切分析或分子克隆很有【yǒu】好处【chù】。

⑦引物【wù】的【de】特异性：引物应【yīng】与核酸序列【liè】数据【jù】库的其它序列无明显同源性。

引物【wù】量：每条引【yǐn】物的浓【nóng】度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会【huì】引起错配【pèi】和非特异性【xìng】扩增【zēng】，且可增加引【yǐn】物之间形【xíng】成二聚体的机会。