汉氏巴尔通体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：汉氏巴尔通体PCR检测试剂盒

英文名称：Bartonella henselaePCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微【wēi】升【shēng】

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反【fǎn】应的物质主【zhǔ】要有五【wǔ】种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，汉氏巴尔通体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引【yǐn】物与模板【bǎn】DNA互补的程度。理论【lùn】上，只要知【zhī】道任何一段模板【bǎn】DNA序列， 就能【néng】按其设计互【hù】补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计【jì】引物【wù】应遵【zūn】循【xún】以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可扩增【zēng】长至10kb的【de】片【piàn】段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-19%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易【yì】出【chū】现非特【tè】异条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧【mì】啶核苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免引物内部出现二级结【jié】构，避免两条【tiáo】引物间互补，特别是3'端的互补，否则会【huì】形成引物二聚【jù】体，产生【shēng】非特异的扩【kuò】增【zēng】条【tiáo】带。

⑤引物【wù】3'端【duān】的碱基【jī】，特别是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格要【yào】求配对，以避免因末【mò】端碱基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或能加上【shàng】合适的酶切位点， 被扩增的靶序列【liè】*有【yǒu】适宜的酶【méi】切位点【diǎn】， 这对酶切【qiē】分析或分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特异【yì】性：引物应与【yǔ】核酸序列数据库的【de】其【qí】它序列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引【yǐn】物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生所需要【yào】的结【jié】果为好，引【yǐn】物【wù】浓度偏【piān】高会【huì】引【yǐn】起错配和非特异性扩增【zēng】，且可增加引物之【zhī】间形成二【èr】聚体的机会。