海藻bai伯史坦菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：海藻百伯史坦菌PCR检测试剂盒

英文名称：Bibersteinia trehalosiPCR

准备物品：

清【qīng】理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微【wēi】升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五【wǔ】种即【jí】引物【wù】、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，海藻百伯史坦菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板【bǎn】DNA互补的【de】程度【dù】。理论上【shàng】，只要知道任何一段模【mó】板【bǎn】DNA序列【liè】， 就能按其设计互补的寡核苷酸链【liàn】做引物【wù】，利用PCR就可将模板【bǎn】DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩【kuò】增跨【kuà】度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-19%为宜【yí】，G+C太少扩增【zēng】效果不佳，G+C过多易出现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶【dìng】核苷【gān】酸的成【chéng】串排列。

④避免引物内部出现二【èr】级结构，避免【miǎn】两条引物【wù】间互补【bǔ】，特【tè】别【bié】是3'端【duān】的互补，否则会形成引物【wù】二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引【yǐn】物【wù】3'端【duān】的碱基，特别是末及倒数第【dì】二个碱基，应严格【gé】要求【qiú】配对，以避免因【yīn】末端碱基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中有或能加【jiā】上合适的【de】酶切【qiē】位点， 被【bèi】扩增的靶序列【liè】*有【yǒu】适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或分子克【kè】隆很有好处。

⑦引物【wù】的特异性：引物【wù】应与核酸【suān】序列【liè】数据库的其它序列无明显【xiǎn】同源性。

引物量：每条引物的浓【nóng】度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引【yǐn】物量产生【shēng】所【suǒ】需【xū】要的结果为好，引物【wù】浓度偏【piān】高会引起错配和非特异性扩增，且可增【zēng】加【jiā】引物之间形成二聚体的机会。