光滑念珠菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：光滑念珠菌PCR检测试剂盒

英文名称：Candida glabrataPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶【róng】解【jiě】液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                      1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主【zhǔ】要有五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，光滑念珠菌PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决【jué】于引物与模板DNA互【hù】补的程【chéng】度。理【lǐ】论上，只【zhī】要知道【dào】任何一段模板DNA序列， 就【jiù】能按其设计互补【bǔ】的寡核【hé】苷酸链做引物【wù】，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在【zài】体外大量扩增。设计引物应遵【zūn】循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定【dìng】条件下可【kě】扩【kuò】增长至10kb的片【piàn】段。

③引物【wù】碱基：G+C含量以9-20%为宜，G+C太【tài】少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出【chū】现【xiàn】非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分【fèn】布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列【liè】。

④避免引物内部【bù】出现二【èr】级结构，避免两条引物间互补【bǔ】，特别是3'端【duān】的互补【bǔ】，否则会形【xíng】成引物二聚体，产生非特异【yì】的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒【dǎo】数【shù】第【dì】二个碱基，应严格要求配对【duì】，以避免因末【mò】端碱基不【bú】配对而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的【de】酶切【qiē】位点， 被扩【kuò】增的靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或分子【zǐ】克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应【yīng】与核酸序列数据【jù】库【kù】的其它序【xù】列无【wú】明【míng】显同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓度【dù】0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引【yǐn】物量产生所需要的结果为好，引物浓度【dù】偏【piān】高会引起错配【pèi】和非特异【yì】性【xìng】扩增，且可增加引物之间形【xíng】成二【èr】聚体的机会。