古柏线虫通用PCR检测试剂盒

产品信息：

产品名称：古柏线虫通用PCR检测试剂盒

英文名称：Cooperia spp.PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的【de】物【wù】质主要有五种即引物【wù】、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，古柏线虫通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性【xìng】取决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程【chéng】度。理论上，只【zhī】要【yào】知道任何【hé】一段模【mó】板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡核苷酸链做引物【wù】，利用【yòng】PCR就可将模板【bǎn】DNA在【zài】体外【wài】大【dà】量【liàng】扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以【yǐ】200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩增长至10kb的【de】片【piàn】段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-20%为宜【yí】，G+C太少扩增【zēng】效果不佳【jiā】，G+C过多易出现非特异【yì】条带。ATGC*随机分布【bù】，避免5个以上【shàng】的嘌呤或嘧啶核苷【gān】酸的成【chéng】串排【pái】列。

④避【bì】免引物内部出【chū】现二【èr】级结【jié】构，避免两条引物间互补，特【tè】别是3'端的互补【bǔ】，否则会【huì】形成引物二聚体，产生非特异【yì】的扩【kuò】增条带。

⑤引物3'端的碱基【jī】，特【tè】别【bié】是末及倒数第二个【gè】碱基，应严格【gé】要求【qiú】配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能加上合适的酶切【qiē】位点， 被扩增的【de】靶【bǎ】序列*有【yǒu】适【shì】宜的酶切位点， 这对酶切分析【xī】或分子克【kè】隆很有好处。

⑦引物的特异性【xìng】：引物应【yīng】与核酸序列数据库【kù】的其它【tā】序列无明【míng】显同【tóng】源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所【suǒ】需要【yào】的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高【gāo】会引起错配和非特异性扩【kuò】增，且可增【zēng】加【jiā】引物【wù】之间形成二聚体的【de】机【jī】会。