构巢曲霉PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：构巢曲霉PCR检测试剂盒

英文名称：Aspergillus nidulansPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明【míng】书                                      1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的物质主要有五种【zhǒng】即【jí】引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，构巢曲霉PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决于引【yǐn】物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模【mó】板DNA序列【liè】， 就能按其设计互【hù】补【bǔ】的寡核【hé】苷【gān】酸链【liàn】做【zuò】引物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在【zài】体外大【dà】量【liàng】扩增。设计引物【wù】应遵循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下可扩增【zēng】长至10kb的【de】片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量【liàng】以9-20%为宜，G+C太少扩【kuò】增效果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免【miǎn】5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶核苷【gān】酸的成串排列【liè】。

④避免引【yǐn】物内部【bù】出现二级【jí】结构，避免两条引物间互【hù】补，特别是3'端的互补【bǔ】，否则会形成【chéng】引【yǐn】物二聚体，产生非【fēi】特异的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别【bié】是末及倒【dǎo】数第二个碱基，应严格要求配【pèi】对【duì】，以避免因末端碱基【jī】不配对而导【dǎo】致【zhì】PCR失【shī】败。

⑥引物中【zhōng】有【yǒu】或【huò】能加上合【hé】适的酶【méi】切位【wèi】点， 被扩增的靶【bǎ】序列*有适宜的【de】酶切位点， 这对酶切【qiē】分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特【tè】异【yì】性：引【yǐn】物应与核酸序列数据库【kù】的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的【de】浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生所需要的【de】结果【guǒ】为好，引【yǐn】物【wù】浓度偏高【gāo】会引起错配【pèi】和非特异性扩增，且可【kě】增【zēng】加引物之【zhī】间形成二聚体的机会【huì】。