刚果嗜皮菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：刚果嗜皮菌PCR检测试剂盒

英文名【míng】称：Dermatophilus congolensisPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫【háo】升

产品【pǐn】说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应【yīng】的物质主要有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，刚果嗜皮菌PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性【xìng】取决于引物【wù】与模板DNA互补的程度【dù】。理论上，只要知道任何【hé】一段【duàn】模板DNA序列， 就【jiù】能【néng】按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将【jiāng】模【mó】板DNA在体外大量【liàng】扩增。设计【jì】引物应遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增【zēng】跨度【dù】： 以200-500bp为【wéi】宜，特定条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。

③引物碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-20%为宜【yí】，G+C太【tài】少扩【kuò】增效果不佳【jiā】，G+C过多易出现非【fēi】特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧【mì】啶核苷【gān】酸的成串排列。

④避【bì】免引物【wù】内部出现二级结构，避【bì】免两【liǎng】条引物间互【hù】补，特别是【shì】3'端的互补，否【fǒu】则会形成【chéng】引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱【jiǎn】基，特别【bié】是末及倒数【shù】第二【èr】个碱基，应【yīng】严格要求【qiú】配【pèi】对，以避免因末【mò】端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有【yǒu】或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点， 这对酶【méi】切分【fèn】析或【huò】分子克【kè】隆很有【yǒu】好处。

⑦引物的特【tè】异性：引【yǐn】物应与核酸【suān】序【xù】列数据库的其它序列【liè】无【wú】明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产【chǎn】生所需要【yào】的结果为好，引物浓度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩增，且【qiě】可增加引【yǐn】物之间形成【chéng】二聚【jù】体的【de】机会。