杆状巴尔通体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：杆状巴尔通体PCR检测试剂盒

英文【wén】名【míng】称：Bartonella bacilliformisPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀【xī】释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应【yīng】的【de】物质主要【yào】有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，杆状巴尔通体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引【yǐn】物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上，只要知【zhī】道任何【hé】一段模板DNA序列， 就能【néng】按其【qí】设计互【hù】补【bǔ】的【de】寡核【hé】苷酸链【liàn】做引物【wù】，利用PCR就可将模板DNA在体外大量【liàng】扩增。设计【jì】引物【wù】应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定【dìng】条【tiáo】件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱【jiǎn】基：G+C含量以【yǐ】9-20%为宜，G+C太少扩增效果不【bú】佳，G+C过多【duō】易出【chū】现非特异条带【dài】。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧【mì】啶核苷酸【suān】的成串排列。

④避【bì】免引物内部出现二级结构，避免【miǎn】两条【tiáo】引物【wù】间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产【chǎn】生非特【tè】异【yì】的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的【de】碱基，特别是末及倒数第【dì】二个【gè】碱基，应严格【gé】要求【qiú】配对，以避免因末端碱【jiǎn】基不配对而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中有或能加上合【hé】适【shì】的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这【zhè】对【duì】酶切【qiē】分析【xī】或分子克隆很有好处。

⑦引【yǐn】物【wù】的特异性：引物应【yīng】与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无明【míng】显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要【yào】的结果为【wéi】好【hǎo】，引【yǐn】物【wù】浓度偏高会引【yǐn】起错配和非特【tè】异【yì】性扩增，且可增加引物之间【jiān】形成二聚体的机【jī】会。