伽氏疏螺旋体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：伽氏疏螺旋体PCR检测试剂盒

英文名称：Borrelia gariniiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升【shēng】

染色【sè】液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品【pǐn】说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主【zhǔ】要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，伽氏疏螺旋体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板【bǎn】DNA互【hù】补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一段模【mó】板DNA序列， 就能按其设计互补的【de】寡核苷【gān】酸链做引物，利用【yòng】PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物【wù】应遵循【xún】以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件下可扩增长至【zhì】10kb的【de】片【piàn】段。

③引物碱基：G+C含【hán】量以9-20%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易出现非特异条带【dài】。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的【de】嘌呤【lìng】或嘧啶核苷酸的【de】成【chéng】串排列。

④避免引【yǐn】物【wù】内部出现二级结构【gòu】，避免【miǎn】两条引物间【jiān】互补，特别是3'端的【de】互补，否则会【huì】形成【chéng】引物【wù】二【èr】聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱【jiǎn】基【jī】，特【tè】别是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格要求配对【duì】，以避免因【yīn】末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或能加【jiā】上合适【shì】的酶切【qiē】位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切分析或【huò】分【fèn】子克隆很有好处【chù】。

⑦引【yǐn】物的特异性：引物应与核【hé】酸序列数据库【kù】的其它序列【liè】无【wú】明显同【tóng】源性。

引物量【liàng】：每【měi】条引【yǐn】物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需【xū】要的结果为好【hǎo】，引物浓【nóng】度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可【kě】增加引物之间形【xíng】成二聚【jù】体的【de】机会。