副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：Avibacterium paragallinarumPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液【yè】（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主【zhǔ】要有五种即引物、酶【méi】、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决【jué】于【yú】引物【wù】与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上，只要知道任何一段【duàn】模【mó】板DNA序列， 就能按【àn】其【qí】设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模【mó】板【bǎn】DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应遵循以下【xià】原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件【jiàn】下可扩【kuò】增长【zhǎng】至【zhì】10kb的片段。

③引物碱基【jī】：G+C含【hán】量以9-20%为宜【yí】，G+C太【tài】少扩增效果不佳，G+C过多易出【chū】现非【fēi】特异【yì】条带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上【shàng】的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避【bì】免引物内部出现二级结构，避【bì】免两【liǎng】条引【yǐn】物【wù】间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物【wù】二聚体，产生非特异的扩增条【tiáo】带【dài】。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数【shù】第二【èr】个碱基，应严格要【yào】求配对，以避免【miǎn】因【yīn】末【mò】端碱基不【bú】配对【duì】而导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增【zēng】的【de】靶序列*有适宜【yí】的酶切【qiē】位【wèi】点【diǎn】， 这对酶切分析【xī】或分子【zǐ】克隆很有好【hǎo】处。

⑦引物【wù】的特异【yì】性：引物应与核酸序列数据库的【de】其【qí】它【tā】序列无明显同【tóng】源性。

引物【wù】量：每条引物【wù】的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所需【xū】要的结果【guǒ】为【wéi】好，引物浓度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩增，且可增【zēng】加引物之间形成二聚体的机【jī】会。