副百日咳波氏杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：副百日咳波氏杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Bordetella parapertussisPCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫【háo】升

染色液【yè】（t B）                                 微升【shēng】

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶【róng】解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要有五【wǔ】种即引物、酶【méi】、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，副百日咳波氏杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性取决于引物【wù】与【yǔ】模板DNA互补的【de】程度。理【lǐ】论【lùn】上【shàng】，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按【àn】其设计互补的寡【guǎ】核【hé】苷酸链做引物【wù】，利用【yòng】PCR就可将模【mó】板DNA在体外大量扩增。设计引物【wù】应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩【kuò】增【zēng】长【zhǎng】至10kb的片段。

③引物【wù】碱基【jī】：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异条带。ATGC*随【suí】机【jī】分布，避【bì】免5个以上的【de】嘌【piào】呤或嘧啶核【hé】苷酸【suān】的成串排列。

④避免引【yǐn】物内部出现二级结【jié】构【gòu】，避【bì】免两条引物间互补【bǔ】，特别【bié】是3'端的【de】互补，否则会【huì】形成引物【wù】二聚体，产生非特异的【de】扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的碱基【jī】，特别【bié】是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格【gé】要【yào】求配对，以避免因末端碱【jiǎn】基不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物中【zhōng】有或能加上合【hé】适的酶切【qiē】位点， 被扩增的【de】靶【bǎ】序列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好【hǎo】处。

⑦引【yǐn】物的特【tè】异性：引【yǐn】物应与【yǔ】核酸【suān】序列数据库的其它序列无明显同源性【xìng】。

引【yǐn】物量【liàng】：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以【yǐ】*引【yǐn】物量产生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度偏高【gāo】会引起错配和非特异性扩增，且【qiě】可增加引物【wù】之间【jiān】形【xíng】成二聚体的机会。