附红细胞体属通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：附红细胞体属通用PCR检测试剂盒

英文名称：Eperythrozoon spp.PCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主【zhǔ】要有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，附红细胞体属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的【de】特异性【xìng】取决于引物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一【yī】段模板DNA序列， 就能按其【qí】设计互补的寡核苷酸【suān】链做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在体外大【dà】量【liàng】扩【kuò】增。设计引物应遵【zūn】循【xún】以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以【yǐ】200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下【xià】可【kě】扩增长至10kb的片段。

③引物【wù】碱【jiǎn】基【jī】：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少【shǎo】扩增【zēng】效果不佳【jiā】，G+C过多易出现非特异条带【dài】。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上【shàng】的嘌呤【lìng】或嘧啶核苷酸的【de】成串排列。

④避【bì】免引【yǐn】物内部出现【xiàn】二级结构，避免【miǎn】两条引物间互补【bǔ】，特别【bié】是【shì】3'端的互补，否则会形成引物二【èr】聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱基，特别是【shì】末及【jí】倒数第二个【gè】碱基，应【yīng】严格要求配【pèi】对，以【yǐ】避免【miǎn】因末端【duān】碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有或能加上合适的酶【méi】切位点， 被扩增的【de】靶序【xù】列*有适宜的酶切位点， 这对酶【méi】切分析或分【fèn】子克隆很有【yǒu】好处【chù】。

⑦引【yǐn】物的【de】特异性：引物应与核酸序列数据库【kù】的其它序列无【wú】明显同源性。

引物量：每【měi】条【tiáo】引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需要的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高会引【yǐn】起错配和非特【tè】异性扩增，且可增加引物之间形成二【èr】聚体【tǐ】的机【jī】会。