弗氏柠檬酸杆菌PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：弗氏柠檬酸杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Citrobacter freundiiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色【sè】液【yè】（t B）                                 微升

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品【pǐn】说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的物质主要有五种即【jí】引物【wù】、酶、dNTP、模板和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，弗氏柠檬酸杆菌PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异【yì】性【xìng】取决于引物【wù】与模板DNA互补的程度。理【lǐ】论上，只要知道任何一【yī】段模【mó】板【bǎn】DNA序列【liè】， 就能按其设【shè】计互补【bǔ】的寡核苷酸【suān】链【liàn】做引物【wù】，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特定条件下【xià】可扩【kuò】增【zēng】长至10kb的片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少扩增【zēng】效【xiào】果不佳，G+C过【guò】多易出现【xiàn】非特异【yì】条带。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的嘌呤或嘧啶核苷酸【suān】的成串排列【liè】。

④避免引物内部出现二【èr】级结构，避免【miǎn】两条引物间【jiān】互补，特别【bié】是3'端的互补，否则会形成【chéng】引【yǐn】物二【èr】聚体，产生【shēng】非特异的【de】扩增条带。

⑤引物3'端的【de】碱基，特别【bié】是末及倒数第二个【gè】碱【jiǎn】基，应严格要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不配【pèi】对【duì】而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的【de】靶序列【liè】*有适宜的酶切位点， 这【zhè】对【duì】酶【méi】切分【fèn】析或分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的【de】特异性：引物应与核酸【suān】序列数据【jù】库【kù】的其它序列【liè】无明显同源性【xìng】。

引物量【liàng】：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生【shēng】所需【xū】要的结果为好，引物【wù】浓度偏高【gāo】会引起错配【pèi】和非特异性【xìng】扩增，且可增加引物之间形【xíng】成二聚【jù】体的机会。