非洲猪瘟病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：非洲猪瘟病毒PCR检测试剂盒

英文名称：African Swine Fever Virus(ASFV)PCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反【fǎn】应的物质主要有五种【zhǒng】即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，非洲猪瘟病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引【yǐn】物【wù】与模板DNA互补的程度【dù】。理【lǐ】论【lùn】上，只【zhī】要知道任何一段模板【bǎn】DNA序列， 就【jiù】能按其设计【jì】互补的寡核【hé】苷酸链做引物，利【lì】用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计引【yǐn】物应【yīng】遵循以【yǐ】下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜【yí】，特【tè】定【dìng】条件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的片【piàn】段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少扩增效果不【bú】佳，G+C过多易【yì】出现非特异条带。ATGC*随【suí】机分【fèn】布，避免5个以【yǐ】上的【de】嘌呤或嘧啶核【hé】苷酸的成串排列。

④避免引物【wù】内【nèi】部出现【xiàn】二【èr】级【jí】结构，避免两【liǎng】条引物间互补，特别是3'端【duān】的互补，否则会【huì】形成引物二聚体，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避【bì】免【miǎn】因【yīn】末端碱【jiǎn】基【jī】不配对【duì】而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点【diǎn】， 被【bèi】扩增【zēng】的靶序列【liè】*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析【xī】或【huò】分子克隆很有【yǒu】好【hǎo】处【chù】。

⑦引物的特异性：引【yǐn】物应与核酸序列数据库的其它序【xù】列【liè】无明显同【tóng】源【yuán】性。

引【yǐn】物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生【shēng】所需要【yào】的【de】结【jié】果为好，引物浓度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩【kuò】增【zēng】，且可增加引物【wù】之【zhī】间形【xíng】成二聚体【tǐ】的机会【huì】。