非洲马瘟病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：非洲马瘟病毒PCR检测试剂盒

英文【wén】名称：African Horse Sickness Virus(AHSV)RTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色液（t B）                                 微【wēi】升【shēng】

稀释液【yè】（C）                                   毫升

溶解【jiě】液（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                      1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加【jiā】PCR反应的物质主【zhǔ】要【yào】有五种即【jí】引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，非洲马瘟病毒PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的【de】特异【yì】性【xìng】取决【jué】于引物与模【mó】板DNA互补的程【chéng】度。理论上，只要知道任【rèn】何一段模板DNA序列【liè】， 就能按【àn】其设计互补的寡核苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就【jiù】可将模板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增【zēng】跨【kuà】度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件下【xià】可扩增长至10kb的【de】片段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含【hán】量以9-20%为宜，G+C太【tài】少【shǎo】扩【kuò】增效果不【bú】佳，G+C过【guò】多易出现【xiàn】非特【tè】异条带。ATGC*随机分布，避免5个【gè】以上的嘌呤或【huò】嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物【wù】内部【bù】出现二级结构，避【bì】免两条【tiáo】引【yǐn】物间互补，特别是3'端【duān】的互补，否【fǒu】则会形成引物二聚【jù】体，产生非特【tè】异的扩增条带【dài】。

⑤引物【wù】3'端【duān】的碱【jiǎn】基，特别是末及倒数第二【èr】个碱【jiǎn】基，应【yīng】严格【gé】要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引【yǐn】物【wù】中有或能加上合适的酶切【qiē】位点， 被【bèi】扩增的靶序列*有适宜的酶切位点【diǎn】， 这【zhè】对酶【méi】切分析或分子克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物的特异性：引物【wù】应与核酸序列【liè】数据【jù】库的其它序【xù】列无明显【xiǎn】同【tóng】源性。

引物量：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产【chǎn】生所需要的【de】结果为好，引【yǐn】物【wù】浓度偏高会引【yǐn】起错配和【hé】非特异【yì】性扩增，且可【kě】增加引物之【zhī】间形成【chéng】二聚体的机会。