产品时间:2024-9-22
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产品信息:
产品名称:短古柏线虫PCR检测试剂盒
英文名称:Cooperia curticeiPCR
准备物品:
清理液(A) 毫升
染色【sè】液(t B) 微升
稀【xī】释液(C) 毫升
溶【róng】解液(tD) 毫升【shēng】
产品【pǐn】说明书 1份【fèn】
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加【jiā】PCR反应的物质主【zhǔ】要有【yǒu】五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,短古柏线虫PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物【wù】的特异性【xìng】取决于引物与模【mó】板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模【mó】板DNA序列【liè】, 就能按【àn】其【qí】设计【jì】互补【bǔ】的寡核苷【gān】酸链做【zuò】引物,利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条【tiáo】件下【xià】可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量【liàng】以9-22%为【wéi】宜,G+C太少扩【kuò】增效果不佳,G+C过多易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机【jī】分【fèn】布【bù】,避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。
④避免引物内部【bù】出现二【èr】级结构,避免两条引物间【jiān】互补,特别是【shì】3'端的互补【bǔ】,否则会形成引物二聚体,产生非【fēi】特异【yì】的扩【kuò】增【zēng】条【tiáo】带。
⑤引【yǐn】物3'端的碱基,特别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基,应严格要【yào】求配对【duì】,以避免因末端碱基不【bú】配对而【ér】导致PCR失败【bài】。
⑥引物中有或能【néng】加上合适的酶切位【wèi】点【diǎn】, 被扩增的靶【bǎ】序列*有【yǒu】适宜的酶切位【wèi】点, 这对【duì】酶切分析或分子克隆【lóng】很【hěn】有【yǒu】好处。
⑦引物的【de】特异性:引物应与核【hé】酸序列【liè】数据【jù】库的其【qí】它【tā】序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或【huò】10~100pmol,以*引物【wù】量产生所需要的结果为【wéi】好,引物浓度偏高会引起【qǐ】错配和【hé】非特异性扩增,且可增加引物之间形【xíng】成二聚体【tǐ】的机会。
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