产品时间:2024-9-22
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产品介绍:
产品名称:东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒
英文【wén】名称【chēng】:Eastern Equine Encephalomyelitis Virus(EEEV )RTPCR
准备物品:
清理液(A) 毫【háo】升
染色【sè】液(t B) 微升
稀【xī】释液(C) 毫升【shēng】
溶解液【yè】(tD) 毫升
产品说明书【shū】 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参【cān】加PCR反【fǎn】应的【de】物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性取决于引物与模【mó】板DNA互【hù】补的【de】程度【dù】。理论上,只要知道任何【hé】一段【duàn】模板DNA序【xù】列【liè】, 就【jiù】能按其设【shè】计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模【mó】板DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物应遵循以下【xià】原则【zé】:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特【tè】定条件【jiàn】下可扩增长【zhǎng】至【zhì】10kb的片段。
③引物【wù】碱基:G+C含【hán】量以【yǐ】9-22%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤【lìng】或【huò】嘧【mì】啶核【hé】苷酸【suān】的成串排【pái】列。
④避免【miǎn】引物【wù】内部出现二级结构,避免两条引物间【jiān】互补,特别【bié】是3'端的【de】互补,否则会【huì】形成引【yǐn】物二聚体,产生【shēng】非特【tè】异的扩增条【tiáo】带。
⑤引物3'端的【de】碱【jiǎn】基,特别是末及【jí】倒【dǎo】数第二【èr】个碱基,应严格要【yào】求配对,以避免因末端碱基不配对【duì】而导致【zhì】PCR失败。
⑥引物中【zhōng】有或能加【jiā】上合适的酶【méi】切位点, 被【bèi】扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切位点, 这对酶切分析【xī】或分子【zǐ】克隆很【hěn】有好处。
⑦引物的特异性:引物【wù】应与【yǔ】核酸序列数【shù】据【jù】库的其它序列无明显同源【yuán】性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或【huò】10~100pmol,以【yǐ】*引物量产生【shēng】所需要【yào】的结果为好,引【yǐn】物浓【nóng】度偏【piān】高会引起【qǐ】错配和非特异性【xìng】扩增,且可增【zēng】加引物之间【jiān】形成二聚体的【de】机会。
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