点状古柏线虫PCR检测试剂盒

产品信息：

产品名称：点状古柏线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Cooperia pectinataPCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染【rǎn】色【sè】液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫【háo】升

产品说【shuō】明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质主要【yào】有五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，点状古柏线虫PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异【yì】性取决【jué】于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上，只要知道【dào】任何一段模板DNA序【xù】列， 就能按其设计互补的寡核【hé】苷酸链做【zuò】引【yǐn】物，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外【wài】大【dà】量【liàng】扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度： 以200-500bp为【wéi】宜，特定【dìng】条件下可【kě】扩增长至10kb的【de】片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量【liàng】以9-22%为【wéi】宜，G+C太【tài】少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异【yì】条带。ATGC*随【suí】机分布，避免【miǎn】5个以上【shàng】的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免【miǎn】引物内部出现【xiàn】二级结【jié】构，避免【miǎn】两条引【yǐn】物间互【hù】补【bǔ】，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生【shēng】非特【tè】异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别【bié】是末及倒数第二【èr】个碱基，应严【yán】格【gé】要求配【pèi】对，以避免因末端碱基不配【pèi】对【duì】而导【dǎo】致PCR失败【bài】。

⑥引【yǐn】物中有或【huò】能【néng】加上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点【diǎn】， 这【zhè】对酶切分析或【huò】分子克隆【lóng】很有好【hǎo】处【chù】。

⑦引物的特【tè】异【yì】性：引物应与核酸序列数据【jù】库的【de】其它序列无明显同源【yuán】性。

引物量【liàng】：每条引物【wù】的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生所需要的【de】结果为好，引物浓【nóng】度【dù】偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形【xíng】成二聚【jù】体的【de】机会。